sábado, 17 de octubre de 2015

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS EN DIFERENTES MATRICES

RESUMEN

El próximo documento es el resultado de laboratorio realizado el día 08 de Octubre de 2015, como práctica de Bioquímica del programa de Ingeniería Ambiental de la Universidad de Cundinamarca sede Girardot. En esta práctica se reconoció la extracción de lípidos por medio del método Soxleth.

INTRODUCCIÓN 

El método de extracción Soxhlet para la determinación de grasas y aceites es aplicable para determinar lípidos biológicos, hidrocarburos ya sea fracciones pesadas o relativamente polares del petróleo y cuando los niveles de grasas no volátiles pueden alterar el límite de solubilidad del solvente. El método es aplicable en aguas residuales o afluentes tratados que contengan estos materiales, aunque la complejidad de la muestra puede producir resultados desviados a causa de la falta de especificidad

Los jabones metálicos solubles son hidrolizados por acidificación. Sólo los aceites y las grasas sólidas o viscosas presentes se separan de la muestra líquida por filtración sobre una matriz sólida absorbente. Después de la extracción en un aparato soxhlet con solvente orgánico, se pesa el residuo que queda de la evaporación del solvente para determinar el contenido en grasa y aceite. 

En la determinación de grasas y aceites no se mide una cantidad absoluta de una sustancia específica; se determinan grupos de sustancias con características físicas similares con base en su solubilidad en el solvente. Así, el término "grasas y aceites" comprende cualquier material recuperado como una sustancia soluble en el solvente (n-hexano). 

METODOLOGÍA
Para este laboratorio fueron dos los procedimientos para la extracción de lípidos. El primero se realizó mediante el método de Soxleth, primero se pesó 5 o 10 gr de leche en polvo y también el papel filtro, luego de pesar el papel filtro se dobló en forma de cono, se incorporó la muestra, luego se colocó la muestra con el papel filtro en el tubo de extracción y se adicionaron 300 ml de éter de petróleo o benceno al matraz, luego de 2 horas se extrajo la muestra con solvente, después de que se completara la extracción se recuperó la muestra con destilación simple, durante 30 minutos se dejó secar el matraz y después se peso, por último de se extrajo y se dejó secar el residuo y pesarlo para finalmente hacer los cálculos para determinar el porcentaje de materia grasa.
Con el método de Bligh Dyer se determinó la humedad de la muestra para poder mantener la relación de cloroformo, metanol y agua, luego se pesaron 10 gr de la pasta homogénea para después agregar 10 ml de de cloroformo y 20 ml de metanol y se agitó por 10 minutos; después se agregaron nuevamente 10 ml de cloroformo y se homogenizó por 10 minutos, luego se volvieron a agregar 10 ml de agua y agitó por otros 10 minutos, después se dejó reposar la mezcla y luego se observó la separación de las dos fases, posteriormente se retiró la capa metanol agua con un poco de la capa clorofórmica, en seguida se pipeteó 10 ml de la capa clorofórmica y se evaporó a 40°C, luego se llevó a la estufa a 105° por 1 hora, por último se enfrío y se pesó, se repitió el mismo proceso hasta que se obtuvo un peso constante .

RESULTADO Y ANÁLISIS 
  
CONCLUSIÓN

  • Observamos el proceso de extracción de lípidos por método Soxleth.
  • Usamos distintos métodos de extracción de lípidos en el laboratorio de Bioquímica vegetal, de una manera simple, con el fin de extraer grasas (lípidos) de las diferentes harinas.
  • Observamos cada uno de ellos según su clasificación de harina dando como resultados diferentes porcentajes de rendimiento y diferentes concentraciones de grasas.

ANEXOS 







  EXTRACCIÓN DE CARBOHIDRATOS POR MÉTODO CUALITATIVO CON DIFERENTES REACTIVOS




RESUMEN

El siguiente informe es el resultado de laboratorio realizado el 01 de octubre del presente año, como práctica de la asignatura de Bioquímica del programa de Ingeniería Ambiental de la Universidad de Cundinamarca sede Girardot. En dicha práctica se observaron azucares reductores, no reductores y monosacáridos.

INTRODUCCIÓN

Sabiendo que los carbohidratos también llamados “hidratos de carbono” son constituyentes de los tres principales grupos químicos que forman la materia orgánica junto con las grasas y proteínas, se llevó acabo la identificación de carbohidratos lo cual lo hace referencia a los cambios que se dieron en cada una de las muestras de fructosa, sacarosa y almidón. Carbohidratos con los que se trabajó con ayuda de la adición de otras sustancias que reaccionaron, y así pudimos observar cómo fueron esos cambios e identificar los tipos de carbohidratos a los que pertenecían cada uno de los elementos

Por medio de este informe daremos a conocer los cambios que se dieron en las sustancias al ser mezcladas con (almidón), fruta dulce (fructosa), y el azúcar (sacarosa), haciendo referencia a estos como fuentes de carbohidratos; y luego al aplicarles otros elementos reactivos como el lugol , fehling a y b, reactivo de Seliwanoff y  reactivo de Molish que permitieron identificar y comprobar los principales tipos de carbohidratos al que pertenecían cada una de las mezclas, si fueron monosacáridos o polisacáridos , y así verificar si fueron positivos o negativos para cada uno; teniendo en cuenta los colores que se adquirieron en una de las muestras y cuando fueron expuestas al calor con el baño de maría 

METODOLOGÍA

Para este laboratorio fueron varios los procedimientos a realizar para el reconocimiento de los carbohidratos y su clasificación. Para identificar si la lactosa, sacarosa, glucosa y la fructosa eran azúcares reductores o no se uso el reactivo Fehling, con 3 mL de cada una de las muestras y 1 mL de Fehling A y B, después se calentó al baño María, luego observar los resultados. Después se uso el lugol para reconocer los polisacáridos, se agregó 3 mL del glúcido, unas gotas del Lugol y observar lo obtenido. Con el reactivo de Molisch se colocó 2 mL de cada muestra, con 3 gotas de dicho reactivo y por último se agregó 2 mL de ácido sulfúrico y finalmente mirar si en la reacción hay presencia de carbohidratos reductores o no. Para determinar si había presencia de cetohexosas se usó el reactivo de Seliwanoff, se cogieron 5 mL de este reactivo y 3 mL de cada muestra, se calentó por 4 minutos a baño María, la coloración 8 rojo cereza deteminaba que la muestra era positiva. Con el reactivo de Bial se podía evidenciar si existían pentosas en las muestras (sacarosa,lactosa,glucosa y fructosa), colocando 2 ml de cada una de ellas y 4 ml del reactivo de Bial, luego colocandolo a baño María durante 10 o 15 minutos y observar si el resultado era positivo o no. Por último para estudiar los azúcares no reductores se tomó una muestra de sacarosa y 10 gotas de ácido clorhídrico, se calentó por unos minutos y determinar si se logró romper el enlace O-glucosídico. 

RESULTADO Y ANÁLISIS / ANEXOS 







Limón
Reacciona
Bebida hidratante
No reacciono
Gaseosa
Reacciona
lactosa
Reacciona
Sacarosa
Reacciona
glucosa
Reacciona          
fructosa
Reacciona






Limón
Negativo
Bebida hidratante
negativo
Gaseosa
positivo
lactosa
positivo
Sacarosa
positivo
glucosa
positivo              
fructosa
negativo




Limón
Negativo
Bebida hidratante
Negativo
Gaseosa
Negativo
lactosa
negativo
Sacarosa
positivo
glucosa
negativo
fructosa
negativo
CONCLUSIONES
  1. Observamos cualitativa mente un carbohidrato a través de reacciones químicas específicas.
  2. Usamos distintos reactivos con el fin de reconocer cada uno de ellos según su clasificación atómica, esto es un método cualitativo de extracción de carbohidratos.
  3. Observamos cada uno de ellos según su clasificación  por número de átomos de carbono triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas.
  4. Diferenciamos la Sacarosa (azúcar común), Fructosa (refresco), Lactosa (leche), Almidón (harina) en cada uno de los reactivos dando positivos por su cambio de color ya que es un prueba cualitativa





jueves, 10 de septiembre de 2015

EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS (MÉTODO CUALITATIVO)


RESUMEN 


El siguiente informe es el resultado de laboratorio realizado el 27 de agosto del presente año, como práctica de laboratorio de la asignatura de bioquímica de ingeniería ambiental de la UDEC.

En dicha práctica se observó la extracción de ácidos nucleicos de frutas como el banano y la fresa y lograr entender las teorías que hay sobre el ADN, las células y la biología molecular.



INTRODUCCIÓN

Los ácidos desoxirribonucleicos (ADN) y ribonucleico (ARN) son polímeros de nucleótidos formados por una azúcar de cinco carbones  (desoxirribosa en el ADN y ribosa en el ARN), una base nitrogenada (que puede ser adenina, timina, citosina, guanina y uracilo) y una molécula de fosfato.  
La expresión de los genes es la base del metabolismo celular, y por esta se entiende que el ADN se transcribe en ARN, que a su vez se traduce en proteínas. esta secuencia ADN-ARN- proteína constituye el dogma central de la biología molecular.  
Los estudios contemporáneos de ecología molecular se han esforzado en entender las funciones metabólicas de los diferentes componentes biológicos presentes en el ambiente y conocer la diversidad biológica mediante el uso y aplicación de técnicas moleculares basadas en la amplificación de diversas regiones del ADN y ARN. La detención de la expresión de los genes o la presencia de ARN específicos nos permitirá acercarnos a temas como el impacto de los diferentes componentes físicos del ambiente en la expresión del ADN (ya que la simple presencia de ADN no nos indica la actividad de los genes), así como a la regulación metabólica  de los enzimas que son esenciales en el papel ecológico que juegan los organismos dentro de su ecosistema ( ciclos bioquímicosbiorremedaión reciclaje de nutrientes), entre otros. 
En la extracción de ácidos nucleicos, existen diferentes métodos que periten su obtención partiendo de diferentes fuentes por ejemplo; platas plasmáticos, gotas de sangre, cabellos, células bacterianas o eucariotas, etc. El método de extracción para la purificación de ADN depende de la aplicación del anterior. 
en esta practica utilizaremos diferentes frutas. El procedimiento se fundamenta en lisis celular por medios mecánicos y químicosliberación del ácido nucleico.   

METODOLOGÍA


Para este laboratorio fueron tres los procedimientos realizados, en la primera parte se preparó la solución amortiguadora con 6 ml de detergente y 4 ml de agua destilada. Segunda parte se maceró las fresas hasta obtener una consistencia blanda, se mezcló 50 ml de la solución amortiguadora y se dejó reposar por 10 minutos; luego en un tubo de ensayo se añadió la mezcla preparada anteriormente después se agregó  6 ml de alcohol etílico por la pared del tubo de ensayo para evitar que se me mezclaran, se dejó reposar y más tarde se observó una mancha blanca (ADN de la fresa). Y en la tercera parte se practicó el mismo procedimiento de la fresa pero esta vez con el banano.


RESULTADO Y ANÁLISIS


En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN para esto utilizamos La solución de detergente  y sal es capas de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear de la célula de la fresa. . 2º.- Los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y se habrá separado de él por acción del detergente. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. 3º.- El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse. De ahí la facilidad para retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. frio  El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales se quedan en la solución acuosa. 4º.- El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realizaría añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. 5 el azul de metileno es un colorante básico de  formula molecular: C16H18Cl N3S permite distinguir ciertas zonas de la muestra, En este caso vamos a teñir el ADN de la fresa y el banano para si poder distinguirlos y así poder observarlos.



CONCLUSIÓN

Según lo visto en laboratorio podemos concluir que la forma mas casera y fácil 

de poder identificar el ADN dos frutas es la propuesta en clase.



También se puede decir que utilizando una solución amortiguadora podemos 

ver el cambio de color y se identifica claramente el ADN de las frutas.



ANEXOS